practica # 6 TINCION DE GRAM

PRACTICA No. 6 TINCION

MATERIALES:

1. PORTA OBJETOS CON FROTIS TERMINADO
2. MECHEROS DE BUNZEN
3. PAPEL PARA BESTIR MESA
4. ASA DE PLATINO
5. VASO DE PRECIPITADO CON AGUA DESTILADA
6. LUGOL
7. ALCOHOL
8. CRISTAL VIOLETA

DESARROLLO

• Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Este tinte (al final del procedimiento) dejará de color morado solo a las bacterias Gram positivas.
• Enjuagar con agua.
• Agregar lugol y esperar 30 segundos
• Enjuagar con agua.
• Agregar alcohol acetona y esperar 15 s
• Enjuagar con agua.
• Agregar safranina y esperar 1 min. Este tinte dejará de color rosado las bacterias Gram negativas.
• Enjuagar con agua.
Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión

Tinción:

Con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 ºC.
Enjuague:
Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un centímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina en posición inclinada hacia abajo... Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto más.

Decoloración:

Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido azul
Lavado y secado:
Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.

Ya terminado el proceso de tinción se deja secar para agregar aceite de inmersión y así poder observar lo obtenido